Over expression of F-Box Nictaba Promotes Defense and Anthocyanin Accumulation in Arabidopsis thaliana After Pseudomonas syringae Infection
丁香假单胞菌感染后F-Box-Nictaba的过度表达促进拟南芥的防御和花青素积累
丁香假单胞菌。番茄DC3000（Pst DC3000）是一种著名的病原菌和模式生物，用于研究植物与病原菌的相互作用和随后的植物免疫反应。许多研究已经证明了Pst DC3000对拟南芥植物的作用，以及III型效应物是如何促进细菌毒力和致病机理的。F-Box-Nictaba（由At2g02360编码）是一种胁迫诱导凝集素，在Pst DC3000感染后在拟南芥叶片中上调。在本研究中，优化了接种试验，以检查细菌感染后不同表达水平F-Box-Nictaba的转基因拟南芥幼苗的性能。利用多光谱和荧光成像结合分子技术，研究了感染两种毒力菌株（Pst DC3000及其鞭毛蛋白1fliC缺陷突变株）的拟南芥叶片中的疾病症状、F-Box Nictaba转录水平和疾病相关基因。对感染荧光标记Pst DC3000的植物的分析使我们能够研究植物系之间细菌定植的差异。在感染后期，过表达植株的细菌含量降低。我们的研究结果表明，F-Box-Nictaba的过度表达可减少细菌感染后的叶片损伤，而基因敲除和基因敲除系并不比野生型植物更容易受到假单胞菌感染。与野生型和敲除型植物相比，F-Box Nictaba的过表达株系在Pst DC3000感染后花青素含量显著增加，光系统II（Fv/Fm）效率更好，叶绿素含量更高。F-Box-Nictaba的过度表达与水杨酸（SA）相关防御基因的表达增加一致，证实了早期数据显示F-Box-Nictaba是SA依赖性防御Pst DC3000感染的一部分。在假单胞菌感染后，敲除系对植物症状没有明显影响，表明F-BoNictaba基因之间可能存在基因冗余。
图1.转基因品系中的F-BoxNictaba转录水平
在15天龄的幼苗中对F-Box Nictaba的转录水平进行了量化（图1）。过度表达系OE4和OE6显示F-Box Nictaba的转录水平分别增加93倍和468倍。相反，与野生型植物相比，基因敲除系（KD）显示F-Box-Nictaba水平下调10倍。敲除系KO2中F-Box Nictaba的转录水平与野生型植物没有差异。这可能是因为引物没有覆盖缺失区域，但是RNA转录本会产生一个缺陷蛋白。
图2.与模拟处理的植物相比，Pst DC3000 感染对接种后3天的17天龄拟南芥植物中的莲座丛大小、光系统II效率(Fv/Fm)和叶绿素含量 (ChlIdx) 的影响
用PstDC3000感染14天大的拟南芥植物，并在接种后3天进行分析，以确定细菌感染对三种不同植物参数的影响：莲座大小、光系统II的效率和叶绿素含量（图 2-4）。过表达F-Box Nictaba的植物的花环明显小于在相同条件下生长的野生型植物的花环（图 2）。 KD和npr1-1 植物呈现相同的趋势。相比之下，敲除系KO2和KO5产生更大的玫瑰花结。当植物被PstDC3000感染时，所研究的所有植物品系的莲座大小都显着减小，这是感染的一种症状。细菌感染后，OE4、OE6和KD植物的花环仍显着小于WT植物的花环。
图3、4 模拟处理和Pst DC3000接种后3天拟南芥花环的多光谱图像
在模拟处理的和PstDC3000感染的植物中分析了花青素含量（图3、4）。野生型和转基因植物之间的比较分析表明，KO5、KD和npr1-1的 mARI水平低于模拟处理的野生型。在相同条件下，过表达株系的mARI值高于KD、KO2、KO5和npr1-1植物。在Pst DC3000感染后，OE4和OE6系均显示出增加的mARI水平，而在野生型和KO2植物中降低。KD植物在模拟植物中显示出显着较低mARI 水平，但与OE系相似感染后花青素水平显着高于野生型植物。但感染并没有增加KD植物中的花青素含量。在同一株系中，模拟处理后KO株系的花青素含量低于野生型植物，但这些KO株系在感染后的 mARI水平没有显着变化。
