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叶绿素荧光仪光合作用机理
光合作用的是能量及物质的转化过程,首先由叶绿素将光能转化成电能,经电子传递产生ATP和NADPH形式的不稳定化学能,zui终转化成稳定的化学能储存在糖类化合物中。
光反应:吸收光能,合成一些如ATP、NADPH等高能物质,用以维持细胞生长;
暗反应:利用ATP、NADPH固定二氧化碳,生成一些列碳水化合物 叶绿素荧光动力学包含着光合作用过程的重要信息,如光能的吸收和转化。能量的传递与分配、反应中心的状态,过剩能量的耗散以及反映光合作用的光抑制和光破坏。应用叶绿素荧光可以对植物材料进行原位、无损伤的检测,且操作步骤简单。所以叶绿素荧光越来越受到人们的青睐,在光合生理和逆境生理等研究领域有着广泛的应用。
构成
电源
光源:测量光源、光化光源、饱和光源
信号探测器 滤波器(荧光波段通过)
其他传感器
应用领域
植物生理学,物生态学,植物病理学,农学,林学,园艺学,遗传育种,突变株筛选,环境科学,毒理学,水生物学。
叶绿素荧光仪的组成
调制叶绿素荧光仪离不开光调制技术,有了它才能使得我们在有环境光的情况下测量叶绿素荧光;其次就是饱和脉冲技术。所谓饱和脉冲技术,就是提供一个瞬间的强光脉冲,来暂时打断光系统II电子传递过程。光合机构吸收的光能有三条去激途径:光化学反应p、叶绿素荧光f和热耗散d。根据能量守恒原理,假设吸收的光能为常数1,得到1=P+F+D。叶绿素荧光产量可以测量出来,而我们希望得出P和D两个参数。根据基本的数学原理,一个等式有两个未知数是无解的。此时如果给出一个饱和脉冲,暂时打断光化学反应过程,则P=0这个等式就可以求解了。由此可知,饱和脉冲技术的基本作用就是打断光合作用,用于求出光化学反应和热耗散分别用去了多少能量。理想的荧光仪必须能在不改变样品状态的情况下即非破坏性进行生理活性测量,需要满足如下几条要求:
1、测量光必须足够低,只激发色素的本底荧光而不引起光合作用,这样才能获得暗适应后的zui小荧光Fo
2、测量光由一系列微秒级的光脉冲组成,这些短光脉冲可以不同的频率给出。在很低的频率下,即使单个微秒级光脉冲的强度比较高,也不会引起光合作用;
3、用反应迅速、线性范围大的光电二极管或光电倍增管来检测这些由微秒级测量光脉冲激 发的微秒级荧光脉冲;荧光脉冲信号首先由交流耦合放大器放大,然后进一步经选择性锁相放大器处理,只放大和调制测量光同频率的荧光信号,可以有效屏蔽环境中本身就存在的与叶绿素荧光同波长的背景噪音。
4、当打开光化光或饱和脉冲时,可以自动提高测量光频率,以提高信号采点率,有效记录一些比较快速的荧光动力学变化。
叶绿素荧光仪的荧光参数
在叶绿素荧光分析中zui常用的基本荧光参数是初始荧光Fo、暗适应后zui大荧光产量Fm、可变荧光Fv、zui大光化学效率Fv/Fm、光照下zui大荧光产量Fm"、给定光强下稳态荧光Fs、光照下光系统II的有效量子产量Yield、光化学猝灭系数qP、非光化学猝灭系数qP和NPQ。在这里Fo是已经暗适应的光和机构光系统II反应中心均处于开放时的荧光强度,它与所激发的强度和叶绿素浓度有关,而与光合作用的光反应无关。Fm为充分暗适应后的zui大荧光,是已经暗适应的光合机构光系统II反应中心全部关闭时的荧光强度,Fv是荧光的可变部分,受耗散能量的途径因素的影响。Fv/Fm是表明光化学反应状况的一个重要参数,反应光系统II反应中心的zui大光能转换效应。